上市時間：2019-10-07

創(chuàng)新點(diǎn)：效率高

EHA105電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞 南京賽泓瑞生物在感受態(tài)細(xì)胞的研發(fā)方面，實(shí)力雄厚，擁有了克隆、表達(dá)、酵母和農(nóng)桿菌4大類，共計(jì)百余種感受態(tài)細(xì)胞。在電擊感受態(tài)方面，擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類，*提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構(gòu)建方面的成功率。

EHA105電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的詳細(xì)資料：

EHA105農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：
  EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——*抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ，此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：strep，賦予EHA105菌株*抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。
開發(fā)的EHA105電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒(size:11633bp)檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×104cfu/μg；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒（size:40kd）檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103cfu/μg。

EHA105農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞操作說明：
1. 0.2cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5ug質(zhì)粒DNA（質(zhì)粒體積不大于6ul，應(yīng)該用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手輕輕敲打管底混勻，立即插入冰中，用200ul槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3.啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此參數(shù)為Biorad *，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀*的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700ul 無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當(dāng)平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48h即可；平板中同時加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h）。