辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B 是瓊脂糖凝膠CL-4B的辛基衍生物，含有疏水性正辛基。具有較好的流速，在配基和骨架間的鍵很穩(wěn)定，可反復(fù)在pH7.0、120°C熱壓消毒。純化疏水性較弱的蛋白質(zhì)或膜蛋白。
辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱：辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B(Octyl- Sepharose CL-4B)
貨號：S9300
基質(zhì)：4%瓊脂糖凝膠
配基：正丁烷基n-Octyl
配基密度： 40μmol/mL
顆粒大?。?5-165μm
大流速：50cm/h
每毫升結(jié)合量：15-20mgHSA
操作溫度：室溫
辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B使用方法
1.裝柱
將所有的試劑和填料達(dá)到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。
用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如：0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.上樣
樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心、過濾后上柱；
一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度。溫度越大、鹽濃度越高或樣品組分疏水性越強(qiáng)，介質(zhì)對組分吸附越牢。
4.洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或者有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如：0.02-0.05mol/L的PBS
5.再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗
對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
對沉淀蛋白、以疏水作用結(jié)合的蛋白或者脂類物質(zhì)，可用1M NaOH去除。
對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。
7.去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5-6小時或者用0.1M的氫氧化鈉24小時?；蛴靡韵虏襟E去除：
(1)2倍柱體積的70%的乙醇；
(2) 2倍柱體積50Mm Tris-HcL Ph7.5
(3)1倍柱體積4M尿素
(4)3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8.消毒
用0.5-1.0 M NaOH 室溫下洗8-10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B注意事項(xiàng)
(1)密封貯存于4°C-28°C(保存溶液為20%乙醇+0.1 M醋酸鈉)，通風(fēng)、干燥的地方，不能冷凍。用過的柱子貯存于4°C(20%乙醇)。
(2)在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
會員1.png)
