乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也稱乳酸脫氫酶檢測試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒(LDH Release Assay Kit),是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應,通過比色法檢測細胞毒性時釋放的乳酸脫氫酶活性或檢測其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。
本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測,更常用于以LDH釋放為指標的細胞毒性檢測。同時,基于細胞總乳酸脫氫酶活性的檢測,本試劑盒也可以用于檢測細胞增殖和細胞毒性檢測。
細胞凋亡或壞死而造成的細胞膜結構的破壞會導致細胞漿內的酶釋放到培養(yǎng)液里,其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通過檢測從質膜破裂的細胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性,就可以實現(xiàn)對細胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細胞膜完整性的重要指標,并被廣泛用于細胞毒性檢測。LDH釋放被認為是以前使用放射性的51Cr標記細胞,隨后通過51Cr釋放進行細胞膜完整性檢測的安全有效的替代方法。
本試劑盒的基本原理是,在乳酸脫氫酶的作用下,NAD+被還原生成NADH,NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應生成NAD+和強生色物甲臜(formazan),在490nm波長下產生吸收峰,從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關。該酶聯(lián)反應原理的示意圖如下: