質(zhì)粒小量抽提試劑盒(Plasmid Mini Preparation Kit, Plasmid Miniprep Kit)是一種用于從大腸桿菌中進(jìn)行小量質(zhì)?？焖俪樘岬碾x心柱式試劑盒。
      本試劑盒適用于常用的EndA^-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等。對(duì)于EndA⁺菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101
等，可以順利完成質(zhì)粒抽提，但從EndA⁺菌株中抽提獲得的質(zhì)粒會(huì)有輕微的核酸酶污染，如果在內(nèi)切酶緩沖液中37℃孵育1小時(shí)會(huì)導(dǎo)致質(zhì)粒全部降解。從EndA⁺菌株中抽提質(zhì)粒時(shí)*使用的D0007S/D0007M 質(zhì)粒小量抽提試劑盒(通用型)、D0020 質(zhì)粒中量抽提試劑盒(通用型)和D0028 質(zhì)粒大量抽提試劑盒(通用型)。
      野生型大腸桿菌中表達(dá)Endonuclease I，能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA，如果endA突變失活，其基因型會(huì)被標(biāo)注為endA1，相應(yīng)的突變菌株被稱為EndA^-菌株，而野生型菌株則被稱為EndA⁺菌株。常見的EndA^-和EndA⁺菌株參見附表1。從EndA⁺菌株中抽提的質(zhì)粒，微量核酸酶和質(zhì)粒結(jié)合而容易被共純化，導(dǎo)致容易降解。
      本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下，使質(zhì)粒能在離心過柱的瞬間，結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上，在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫，從而實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，12個(gè)樣品只需不足30分鐘即可完成。
      每個(gè)質(zhì)粒純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為20微克。每個(gè)純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌。抽提所得質(zhì)粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質(zhì)粒量會(huì)受質(zhì)?？截悢?shù)等因素影響。抽提獲得的質(zhì)粒DNA的OD260和OD280比值也會(huì)因菌種不同等原因而略有波動(dòng)。
      本試劑盒抽提所得到的質(zhì)?？芍苯佑糜谵D(zhuǎn)染細(xì)胞，DNA測(cè)序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等。